摘　要：肝纤维化是一种常见的慢性进行性肝病。血小板衍生生长因子(PDGF)为重要的促细胞活化、分裂、增殖剂，在肝纤维化的发生、发展中起着非常重要的作用。PDGF与其相应受体结合后经细胞信号传导才能发挥作用，晚近通过对PDGF与其受体结合后细胞内信号传导途径的研究，发现阻断其信号传导有可能阻断PDGF的作用，发挥抗肝纤维化作用。

　　关键词：血小板衍生生长因子；肝纤维化；抗纤维化

　　肝纤维化是一种常见的慢性进行性肝病。肝脏星形细胞(Hepatic stellate cell ,HSC)的激活、增殖以及细胞外基质的沉积是肝纤维化的两个重要环节^［1］。血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)能够强烈刺激肝星形细胞的增殖、迁移，促使其胶原的产生和沉积，在肝纤维化发生发展中起着非常重要的作用^［2］。因此抑制PDGF的产生或对其作用进行拮抗是抗肝纤维化的重要途径。

1　PDGF及其受体的分类及结构

1.1　PDGF分类、结构及来源
　　PDGF可分为分子量为31KD含有7%糖的PDGF I及28KD含4%糖的PDGF　Ⅱ。两者均由两条高度同源的A链及B链组成，这使PDGF具有三种形式的二聚体结构，即PDGF-AA，PDGF-BB及PDGF-AB^［2，3］。
　　体内单核/巨噬细胞是主要合成PDGF的细胞。在生理状态下，PDGF以α颗粒的形式储存于血小板中，肝脏受损时，巨噬细胞、血小板、浸润的炎细胞、受损的内皮细胞及激活的肝星形细胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式发挥作用^［4，5］。
1.2　PDGF受体分类、结构及激活方式
　　PDGF必须与细胞膜上的相应受体结合后才能发挥其生物学效应。PDGF受体由两种亚单位α及β构成，其分子量为170～180KD。二者与PDGF结合力相差很大，α单位与PDGF A链及B链有较高的亲和力，而β亚单位仅与B链有高亲和力。所以α亚单位可与PDGF-AA、PDGF-AB及PDGF-BB结合，β亚单位仅与PDGF-BB及PDGF-AB结合^［2，3］。Wang等^［5］人的研究证明，在肝纤维化时，HSC表面的PDGF受体以β受体为主，与PDGF-BB具有较强的亲和力，认为PDGF-BB以及PDGF-β在肝纤维化过程中的作用尤为突出。
　　PDGF受体是一种跨膜糖蛋白，具有酪氨酸蛋白激酶活性，由细胞外N端与PDGF特异识别的结构域、单链顺序跨膜的中间疏水结构域和细胞内C端具有酪氨酸蛋白激酶活性的肽段结构域组成。当受体与其配体结合后促使两个受体分子形成二聚体，激活细胞内结构域酪氨酸残基自身磷酸化，或促使激活特殊靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化，从而将信号传入细胞内，经级联式放大瀑布效应调控细胞的生命活动，包括靶细胞的分裂增殖^［6］。

2　PDGF生物学效应和在肝纤维化中的作用

　　实验证明PDGF是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力。肝受损时，大量分泌的PDGF刺激间质星形细胞增殖，转化为肌纤维样母细胞，并促使星形细胞迁移，聚集于炎症受损区^［7］。而肌纤维样母细胞合成大量细胞外基质沉积于肝细胞胞间质，促进肝纤维化发生。
　　PDGF能够促进肌纤维母细胞产生胶原，尤其是I型及Ⅲ型胶原。Isbrucker^［1］在体外培养的实验中证明，PDGF可促使未融合猪肝肌纤维样母细胞增殖，使已融合的细胞产生胶原，但对其细胞数量无影响。
　　PDGF还可通过上调组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)抑制胶原酶的作用，以减少细胞外基质的降解^［4，8］。

3　PDGF与抗肝纤维化

3.1　PDGF的细胞内信号传导
　　抑制PDGF的产生和阻断其促纤维化的作用可望成为抗肝纤维化的途径，晚近通过对PDGF与其受体结合后细胞内信号传导途径的研究，发现阻断其信号传导能阻断PDGF的作用^［9］。
　　PDGF与其受体结合后，可激活细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)，PDGF受体发生自动磷酸化，受体位点上的磷酸化酪因同源区2(Src-SH₂）或酪氨酸磷酸区域进行结合^［10］。结合于已激活的PDGF受体的分子包括有磷酯酰肌醇三激酶(PI 3-K)，细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酯酶C、酪氨酸激酶及Crb₂、shc、shb等。经过一系列磷酸化反应，可活化核膜上丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)残基激酶，后作用于核内蛋白转录因子，如癌基因fos、jun、myc等编码的蛋白质，经直线传递信号使DNA的一些活性转录区参与基因表达的调控，或增加拓扑异构酶活力，改变细胞RNA含量，使细胞发生一系列表型改变，促细胞生长和分裂^［7］。(如图1)。

图1　PDGF的细胞内信号传导途径

　　在PDGF发挥的作用中，PI 3-K及ERK途径是膜内信号传导的两个最重要途径。同时，PDGF引起细胞［Ca^2＋］浓度增加也促进了细胞增殖^［6］。
3.2　细胞外信号调节激酶(ERK)及其抑制剂
　　业经证明ERK激活对激发细胞增殖是必不可少的。同时ERK途径与细胞外基质成分胶原的产生有密切关系^［11］。ERK有两种构型，即ERK₁(P44^MAPK)和ERK₂(P42^MAPK)。人类肝星形细胞在ERK激活后继有c-fos激活，进一步作用于DNA转录因子，促细胞分裂^［12］。故对ERK的作用进行干预抑制PDGF诱导的HSC增殖。若预先将HSC与升高细胞内cAMP水平的药物孵育，能明显降低PDGF诱导的ERK磷酸化、ERK活性、c-fos表达及促有丝分裂作用。己酮可可碱(Pentoxiffilly, PTF)是一种磷酸二酯酶抑制剂，可促细胞内cAMP浓度升高，抑制ERK传导途径和细胞增殖^［13］。Preaux^［14］实验证明，PTF可以减少PDGF诱导的细胞增殖，抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成，并使Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA减少，说明抑制胶原合成发生在转录前水平。
3.3　磷酯酰醇三激酶(PI 3-K)及其抑制剂
　　PI 3-K聚集激活PDGF受体，它由85KD的调节亚单位(2个SH-2区域)和110KD的催化亚单位构成。PDGF刺激PI 3-K与其受体结合，使85KD亚单位酪氨酸磷酸化后，激活蛋白激酶C和蛋白激酶B。这一信号传导引起细胞增殖及迁移，并聚集于炎症区^［15］。PDGF-AA、AB及BB均可激活PI 3-K，以PDGF-BB作用最强，这与其促细胞分裂增殖能力有关。PDGF-BB对HSC的增殖和化学趋化性起作 用，而PDGF-A只促HSC增殖，无化学趋化作用，这可能与结合于不同受体，以及与受体后信号传导途径不同有关。渥曼青霉素(wortmannin)是一种真菌代谢产物，可结合PI 3-K，非竞争性抑制PI 3-K活性；但对受体的自动磷酸化和85KD蛋白与受体之间的联系无影响。渥曼青霉素还能部分抑制ERK活性，对它的深入研究，有可能成为一种新的抗纤维化药物^［7］。
3.4　钙离子及其抑制剂
　　钙离子浓度的变化也与细胞增殖有关。实验证明PDGF明显升高细胞内［Ca^2＋］^［17］。其机理可能为PDGF与其受体结合后，酪氨酸激酶自动磷酸化，诱导磷酸肌醇(IP)循环，其循环产生IP₃作用于细胞内皮网特异受体使其Ca^2＋释放，引起细胞内Ca^2＋水平迅速增加启动细胞内信号系统(I相)。IP₃进一步磷酸化产生IP₄又促使细胞外Ca^2＋内流 ，即细胞内Ca^2＋浓度的慢反应(Ⅱ相)^［16］。证实PDGF诱导的Ca^2＋升高主要为细胞外Ca^2＋内流，与“T”型通道打开有关^［17］。发现有机物氯化镍抑制“T”型通道，故有可能抑制PDGF所诱导的有丝分裂。因此，开发“T”通道特异抑制剂可阻断肝纤维化^［9］。国内学者^［18］选用细胞外钙离子拮抗剂维拉帕米(ver)和细胞内钙离子拮抗剂尼卡地平(nic),观察其对大鼠肝细胞胶原合成及升钙作用，结果显示ver可抑制PDGF促胶原合成和升钙效用，若ver与nic合用效果更佳。
3.5　细胞Na^＋-H^＋交换途径及其抑制
　　Di Sario^［19］等人的研究表明：HSC激活伴随着Na^＋-H^＋交换的激活，细胞内pH增加。这种激活依赖于钙离子-钙调蛋白及蛋白激酶C途径。证明PDGF可增加Na^＋-H^＋交换活性，促进细胞分裂。Na^＋-H^＋交换抑制剂阿米洛利(amiloride)可抑制PDGF诱导的细胞增殖，故可能有抗纤维化作用。
3.6　酪氨酸蛋白激酶(TPK)及其抑制剂
　　PDGF与受体结合，激活受体细胞膜内部分的TPK，引起一系列信号传导及调节细胞增殖。因此阻断PDGF作用的关键之一是阻断TPK的活性。槲皮素(quercetin)是一种TPK抑制剂，属黄酮类，可以阻断细胞膜内酪氨酪残基的磷酸化使TPK失活，PDGF不能发挥作用^［20］。故对TPK抑制剂的开发可望成为阻断纤维化的另一途径。

王萍（陕西省人民医院消化研究室，西安　710068）
袁农（陕西省人民医院消化研究室，西安　710068）