乙型肝炎是一种严重影响我国人民健康的疾病。目前,乙型肝炎病毒可分为A、B、C、D、E、F六种病毒基因型。据研究表明乙型肝炎病毒基因型可能与乙型肝炎病毒的感染途径和疾病进程相关。乙型肝炎病毒基因型与乙型肝炎治疗耐药性的关系还有待进一步的研究。因此,建立一种简单易行快捷的分型方法,扩大标本的检测量尤为必要。 现行的乙型肝炎病毒分型方法主要有两种,一种是聚合酶链反应-限制片断长度多态型分析(PCR-RFLP);另一种是单克隆抗体酶连免疫法(ELISA)。单克隆抗体ELISA法方法简单,但要建立一套单克隆抗体则较为困难;PCR-RFLP分型法所需时间较长,步骤较多,遇到混合感染或酶切不完全,就会出现复杂带型,影响分型结果的判断。 由第一军医大学南方医院骆抗先教授、杨洁研究员主持的“国家自然科学基金项目”——《乙型肝炎病毒基因型多引物PCR分型法的初步建立》顺利完成,并成功的建立了一种新的乙型肝炎病毒基因型多引物PCR分型法(Multiplex PCR)。研究人员对114例乙型肝炎病毒全序列进行充分比较分析的基础上,找出每种基因型相对于其他各种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对性A至F型的诊断引物。利用这些引物,仅需一次PCR就可得出分型结果。实验显示,Multiplex PCR分型方法理论上可以鉴定100%的标本,保证了每种基因型的特异性扩增。明显优于以住的PCR-RFLP法。并且简单易行,方法简捷,准确率高,便于大量标本的应用。
(原载:《中华肝脏病杂志》) |